请介绍一下你们的纯化策略
我公司合成的多肽是用制备型反相HPLC进行纯化的,所用的两种流动相中都添加了TFA,pH 2。A相是0.1% TFA于超纯水中,B相是0.1% TFA 于ACN 中,pH 2。样品可以直接用A相溶,或者先用少量B相溶解再用A相稀释。有时可能需要用强溶剂如甲酸、乙酸来溶解疏水肽,具体采用哪种方法要看肽序列。在pH 6.8 时一般很难将肽溶解也很难进行纯化,因此我们一般是先将肽溶解再用两种流动相进行梯度洗脱。所用的pH 6.8的缓冲液为10 mM醋酸铵于超纯水中(流动相A),纯ACN(流动相B)。通过紫外检测器在214 nm处检测,收集不同组分并用MADLI-TOF MS进行成分鉴定,用反相 HPLC分析纯度,然后把目的肽冻干,将冻干的肽合并装入小瓶中,*后,再对合并后的产物进行MS和HPLC分析。
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