什么是多肽的纯度?
多肽的纯度是指HPLC方法在214nm处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长),紫外分光光度计检测不到水和残留的盐不。可发现其他的杂质包括:缺失序列(缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列),截断序列(加帽过程中产生的序列)脱保护不完全序列(产生于整个合成过程或*后的裂解过程)。
多肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产生少量的TFA,如:游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质。通常交付的多肽多含有微量TFA和残留水。即使处于冻干状态,水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着。
在多肽中还存在哪些其他物质(杂质)?
杂质
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纯化前的多肽
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纯化后的多肽(HPLC)
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缺失序列1
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截断序列2
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脱保护不完全序列3
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裂解过程中被修改的序列4
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DTT (dithiothreitol,二巯基苏糖醇)
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☓
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TFA (trifluoroacetic acid,三氟乙酸)
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Acetic acid(醋酸)
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☓
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某个氨基酸发生了副反应的多肽,如脯氨酸异构化等。
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纯化前的多肽中包含的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包含的杂质除了TFA盐,大多数为序列被修改的多肽。
缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列
为避免缺失序列的产生而进行的加帽操作,截断序列即产生于加帽过程中
产生于整个合成过程或*后的裂解过程
保护基重新附着在多肽的其他位置